浅析jetPRIME转染试剂正确的转染步骤

　　jetPRIME转染试剂使用方使，不需要像其它常用转染试剂那样进行各个环节反复优化。但是，为了获得不错的实验效果，我们仍然建议您经过尝试，确定相关优化条件。对于每次新的细胞-质粒转染组合，都做优化试验。其中重要的参数是细胞密度以及转染试剂和DNA的配比。
 

　　通常，转染实验中，贴壁细胞的密度为50%-80%；悬浮培养细胞为1.0-2.0×106/ml。转染时细胞的密度取决于初始培养密度，细胞增殖速度(倍增时间)，以及培养和转染操作的间隔时间。每种新尝试的细胞系适合的细胞密度需要单独确定，并且尽量在今后的实验中保持一致，以便获得稳定的重现率。

 

　　jetPRIME转染试剂正确的转染步骤：
 

　　1.转染前一天，胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染日密度为90-95%。细胞铺板在2ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。
 

　　2.对于每孔细胞，使用250u1无血清培养基(如培养基)稀释。轻轻混匀。
 

　　3.使用前将jetPRIME转染试剂轻轻混匀，用250u1无血清培养基(如培养基)稀释10ul转染试剂，轻轻混匀。稀释后，在5分钟内同稀释的DNA混合(<30分钟)。NOTE：若使用DMEM培养基，则需在5分钟内同稀释的DNA混合。
 

　　4.混合稀释的DNA(第二步)和稀释的试剂(第三步)。室温放置20分钟。
 

　　5.(optional)将6孔板中的旧营养液吸出，用无血清培养基清洗两次。加入2ml无血清配养基。
 

　　6.直接将复合物加入到每孔中，摇动培养板，轻轻混匀。
 

　　7.在37℃，5%C0中保温24-48小时。无需去掉复合物或更换培养基。或者在4-5小时后更换培养生长基也不会降低转染活性。
 

　　8.在细胞中加入复合物24-72小时后，分析细胞抽提物或进行原位细胞染色，检测报告基因活性。这依赖于细胞类型和启动子活性。对稳定表达，在开始转染一天后将细胞传代至新鲜培养基中，两天后加入筛选抗生素。进行稳定表达需要数天或数周。