流式细胞仪相邻或相近通道的荧光素之间经常有较多的光谱重叠,多色流式细胞实验中常会设置单标对照进行补偿调节。实际操作中,调补偿可能是困扰很多用户的一个难题,可能有以下原因: 1、很多标本很珍贵,没有多余的细胞设置单标管; 2、很多抗原弱表达或不表达,缺乏阳性信号难以准确补偿; 3、很多用户会选择偶联相同荧光素的其他强表达的 抗原代替弱表达抗原进行补偿调节,但对于符合 染料该方法不适用,复合染料的易降解性可能每 批之间的补偿值均有所不同。 美天旎公司开发的补偿微球可能代替细胞进行补偿调节。该试剂盒包含两种微球-补偿微球和对照微球,其中的补偿微球表面包被有抗小鼠lgk的抗体,所有鼠来源的lgk抗体(绝大多数人抗原检测的抗体均 为鼠lgk的抗体)均能与其结合,代表阳性信号;二对照微球不能喝其他抗体结合,因此检测为阴性信号。用该试剂盒调节好的荧光补偿矩阵抗原直接应用于细胞的多色流式分析。 组成:(Order no. 130-097-900) 5mL MACS Comp Beads-anti-mouse lgk; 5mL MACS Comp Beads-Blank. 应用: 用于mouse anti-human(mouse lgk抗体)荧光素偶联抗体的补偿调节。 | | 步骤:
1、每管单标管均加入100ul缓冲液,然后加入相应 的荧光抗体; 2、每管各滴入一滴Comp beads和Blank beads,混 匀后避光室温孵育10分钟; 3、每管加入1mL缓冲液后,3000g离心5分钟; 4、弃上清,用1mL缓冲液重悬后即可进行流式检测 ,手动补偿或软件自动补偿后的补偿矩阵条件可直 接用于后面的多色流式细胞分析。 结果:
图中以微球调节FITC和PE之间补偿为例,分别显示补偿调节前后的流式结果。 更多信息请登陆www.univ-bio.com咨询 |
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