优宁维之GPCR（G蛋白偶联受体）信号通路结构

GPCR介绍 

   G蛋白偶联受体（Guanosine-binding Protein Coupled Receptor, GPCR）是细胞信号传导中的重要蛋白质，其拓扑构象为7次跨膜。当膜外的配体作用于该受体时，该受体的膜内部分与G蛋白相互结合，激活G蛋白。G蛋白可通过两种途径，传递细胞外的信息：*种方式是打开跨膜离子通道，让外界的离子进入；第二种方式是激活第二信使，如cAMp、IP3/DAG等。 

   现代新药研究与开发的关键首先是寻找、确定和制备药物筛选靶—分子药靶。药物靶点是指药物在体内的作用结合位点，包括基因位点、受体、酶、离子通道、核酸等生物大分子。迄今已发现作为治疗药物靶点的总数约500个，而G-蛋白偶联的受体（GPCR）靶点占其中受体的绝大多数。

Diseases 

         ·Cancer 
         ·Depression 
         ·Metabolic diseases 
         ·Schizophrenia 
         ·Hypertension 
         ·Migraine 
         ·Pain 
         ·Viral infection (HIV)

GPCR 功能性检测 

  HTRF技术可用来进行第二信使检测、胞内信号分子检测和受体配体结合检测方案，从而从帮助您进行G蛋白偶联受体的研究。 

cAMP检测

  Cisbio提供四个试剂盒进行cAMP检测，分别针对不同的灵敏度和线性范围，其检测原理均基于竞争法。试剂盒中有Eu标记的cAMP抗体和d2标记的cAMP，抗体可以识别cAMP，使Eu与d2接近。Eu受到激发后，其能量可以共振转移到d2上，产生信号。当细胞中有cAMP产生时，其与d2标记的cAMP竞争抗体结合位点，使后者与Eu标记的抗体距离增大，不能产生能量转移，信号下降。

四个试剂盒的比较

cAMP dynamic 2拥有较高的检测灵敏度和
较大的线性范围，适合于大多数Gi/s实验

IP-one检测 

  IP-One试剂盒是钙流检测方法的替代解决方案。钙流反应非常快，需要加样之后马上检测，所以需要配备自动加样的仪器才能检测。而且，钙流检测只能针对与受体快速结合并发挥作用的化合物，不适合起效慢和作用时间长的化合物。IP-One可以非常好地弥补上述缺憾。 

   IP-One检测反映的是第二信使IP3的含量。当样品中加入LiCl后，IP-One不再代谢，而是蓄积在细胞内。试剂盒基于竞争法，其中含 

   有Tb标记的抗IP1单抗和d2标记的IP1。细胞所产生的IP1和试剂盒所提供的标记了d2的IP1竞争抗IP1抗体的抗原结合位点。当Tb标记的抗IP1抗体与d2标记的IP1结合后，会发生能量共振转移，产生比较大的信号。随着细胞内产生的IP1增多，游离的IP1与抗体结合增多，信号逐渐减少。

磷酸化ERK1/2的检测 

   ERK1/2是G蛋白偶联受体所有信号的会聚点，所以可以用磷酸化ERK含量的变化来反应G蛋白偶联受体是否被活化或者抑制。

  磷酸化ERK1/2检测是基于双抗体夹心法的原理。在试剂盒中含有两个抗体，一个抗体是抗磷酸化ERK1/2的抗体，标记d2；另一个抗体是抗ERK1/2其它位点的抗体，标记Eu。

GPCR受体结合检测

Tag-lite技术简介 

    Tag-lite是SANP-Tag与HTRF技术相结合，进行活细胞表面受体分析的一种技术。

    同时，SNAP可以非常容易地融合到蛋白质的N端或C端。通过构建SNAP与目标受体的表达载体，将SNAP与目标受体共表达到细胞膜表面。然后，加入标记了Tb的底物，我们就得到了标记了Tb的目标受体。 

    进行结合实验时，我们加入标记了d2的配体。由于配体与受体结合，Tb与d2之间发生能量共振转移，产生HTRF信号。化合物如果能够与受体结合，则与d2标记的配体竞争，HTRF信号降低。

操作步骤

Tag-lite技术的优势 

     ·无放射性

     ·基于活细胞的GPCR受体配体结合分析的平台，构建的细胞可用于所有功能性检测

免费：4008-168-068 ：info@univ-bio.com