为大家讲解percoll细胞分离液的配置与使用

　　percoll细胞分离液是一种经过聚乙烯吡咯烷酮处理过的硅胶颗粒,经过高速离心后可形成连续密度梯度,由于Percoll扩散常数低,所形成的梯度十分稳定。采用预先形成的密度梯度时可在低离心力(200~1000g)于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。此外,该分离液不穿透生物膜,对细胞无毒害,因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒,还可将受损细胞及其碎片与完好的活细胞分离。Percoll常用于分离和传话植物原生质体、核、叶绿体、和线粒体。
 

　　percoll细胞分离液的配置与使用：
 

　　1、不同浓度(密度)Percoll分离液的制备: 先用9份Percoll分离液与1份8.5% NaCl混合达到生理性渗透压，然后用生理溶液(0.85% NaCl)稀释到所需浓度。
 

　　2、不连续密度梯度Percoll层的制备: 先将试管壁用牛血清湿润，除去多余血清，这种预处理可使逐层叠加的Percoll液平稳沿管壁流下，使形成满意的界面。在制备过程中一般用长针头注射器从高密度向低密度逐层放置，有时相邻两层Percoll比重相差不大时，可将Percoll液放入注射器中，小针头斜面紧贴管壁，任其自然慢慢流下。
 

　　3、装样：样品体积和细胞浓度根据不同细胞而异，一般加样体积不宜过大，细胞浓度也不可过高，否则会影响细胞的分离和回收。
 

　　4、离心：一般采用离心力为400g，时间20～25min。由于多层Percoll之间密度差别不大，因此离心机加速、降速时要慢，要平稳。
 

　　5、取样：当所要分离的细胞绝大部分在两层的界面时，可逐层去除Percoll液后收集界面部位的细胞;有时大部分细胞位于Percoll层中,则需要逐层收集。收获含有Percoll液的细胞经2次洗涤后可供培养或检测用。
 

　　percoll细胞分离液的优点：
 

　　Percoll渗透性低、不穿透细胞、密度高、无毒害，是目前较理想的介质。Percoll密度梯度离心已被多次成功地用于动物细胞及其细胞器的分离，纯化了包括人血液细胞、骨髓细胞、红血球细胞、白血球细胞、淋巴细胞、肝细胞等在内的十余种动物细胞。