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免疫荧光（Immunofluorescence，IF）是一种免疫化学技术，通过将抗体分子与一些示踪物质结合，然后使用显微镜或流式细胞术，利用抗原和抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位或定量。免疫荧光的常规实验步骤包括：样本制备——固定/通透——封闭——免疫染色——封片观察。其中，在免疫染色环节中荧光二抗发挥着关键的作用。如何选择合适的二抗，小优之前和大家介绍过，有想要了解的小伙伴可以点击此处查看。荧荧之光必点通天之亮，星星之火必成燎原之势，本文小优就带大家了解“二抗金标准"——Jackson的荧光二抗！
01 Jackson荧光二抗的优势Jackson ImmunoResearch Inc.（JIR）是著名的进口二抗生产商，致力于生产和偶联亲和纯化的二抗和纯化免疫球蛋白。其产品已被世界各地研究动物、植物和生物医学的科学家广泛应用。公司的发展目标是为研究者提供最新最高品质的二抗，提供最好优质的技术和客户服务。Jackson公司推出的DyLightTM和Alexa Fluor®系列荧光染料，是目前市场上受欢迎、口碑好的，被广泛应用于免疫荧光、免疫组化、细胞成像和荧光蛋白质免疫印迹等实验。Jackson荧光二抗的优势：1. 高灵敏度，线性范围广；2. 高稀释比，性价比高；3. 高特异性：10种特异性，包括IgG(H+L)、IgG Light Chain、IgG F(ab’)2、IgG VHH、IgG Fc、IgG + IgM、IgA + IgG + IgM、IgM、IgA和IgE；4. 种属丰富：16种种属，包括小鼠、大鼠、人、兔、绵羊、羊驼、牛、猫、鸡、狗、山羊、绵羊、豚鼠、马、仓鼠、猪；5. 标记丰富：从蓝光到近红外光谱范围（400 nm~1400 nm）内，涵盖了19种不同的荧光标记染料，分辨率高并且仪器兼容性广；6. 稳定性好：亲和纯化二抗，光耐受性（抗淬灭性）强，水溶性好，储存不会产生沉淀，pH值不敏感；7. 可消除物种之间的交叉反应：Jackson提供超2000种的预吸附二抗，可以大程度地消除了特点物种之间交叉反应，适合用于多标记的IF/IHC/ICC实验，并可获得更低的背景值。8. 性价比高：作为美国进口品牌，Jackson在提供高品质的荧光二抗的同时，也做到了实惠的价格，大大节省大家的科研成本！具体价格请咨询优宁维的销售同事~ 02 Jackson荧光二抗的标记和特点根据发射波长的不同，可以将荧光标记分为以下四类： 
这些荧光标记具体的激发峰和发射峰如下：
几种常见荧光标记的特点：Alexa Fluor®• 亮度和稳定性都很强；• 高度水溶性，在pH4和pH10之间保持荧光；Brilliant Violet™• BV染料是聚合物链，具有较高分辨率和灵敏度；• 一般用于间接流式细胞术；FITC• 常用的荧光标记之一，Ex/Em：492/520，适配较大多数显微仪器；• 亮度和光稳定性比AF系列和BV系列较差；Cyanine™（Cy2/Cy3/Cy5）• 当使用树脂类非水溶性封闭试剂（如DPX和Permount™）时，更推荐使用Cy类的染料；• 非极性环境下，Cy类染料读取时间更少，且更亮（DyLight™和Alexa Fluor®染料水性安封片介质中更亮）；荧光蛋白（R-PE/APC/PerCP）• 可以在较宽的可见光谱范围内被光激发，具有高水溶性，相对较低的等电点；• 推荐用于细胞表面标记：分子量较高，较难穿透细胞和组织。
03 Jackson荧光二抗的应用鉴于Jackson荧光二抗的高灵敏度、高稀释比和高特异性，从而被广泛应用于双重和多重的免疫荧光染色实验，小优也为大家整理了常用配色：
| 常用配色举例 | ||||
| 双色 | 三色 | |||
| 标记 1 | Alexa Fluor® 488 | CyTM2 | Alexa Fluor® 488 | CyTM2 |
| 标记 2 | Alexa Fluor® 594 | CyTM3 | Alexa Fluor® 594 | CyTM3 |
| 标记 3 | Alexa Fluor® 647 | CyTM5 | ||
| 复染 | DAPI | |||
接下来我们就来看看Jackson荧光二抗的实例应用吧～
荧光二抗在双重免疫荧光染色的中的应用： 
图1：对减数分裂标记物 SYCP3进行免疫标记后，得到的小鼠睾丸的横切面图像（C、D）；用ImageJ程序勾画小鼠睾丸切片中的Cx43+区（E、F）。二抗Alexa Fluor® 488AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG(min X Hu,Bov,Hrs,Rb,Sw Sr Prot)（115-545-146）和Alexa Fluor® 594 AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG(min X Hu,Ms,Rat Sr Prot)（111-585-144）以1：400稀释，样品与一抗在4°C孵育24小时；经过多次PBS洗涤后，加入二抗，在4℃孵育24小时；切片用Hoechst复染，并用共聚焦显微镜或荧光显微镜成像；用ImageJ软件对间质细胞的Cx43染色进行相对定量。
荧光二抗在多标记免疫荧光染色的中的应用： 
图2：大鼠神经纤维多标记染色，三个靶点分别是神经纤维重要标记物PGP9.5、结缔组织中细胞外基质的组成成分之一的硫酸软骨素、基底膜里的三型胶原蛋白，分别用Cy™2 Donkey anti-rabbit IgG (H+L) (min X Bov,Ck,Gt,GP,Sy Hms,Hrs,Hu,Ms,Rat,Shp Sr Prot)（711-225-152）、Cy™3 Donkey anti-mouse IgG (H+L) (min X Bov,Ck,Gt,GP,Sy Hms,Hrs,Hu,Rb,Rat,Shp Sr Prot)（715-165-151）、Cy™5 Donkey anti-goat IgG (H+L) (min X Ck,GP,Sy Hms,Hrs,Hu,Ms,Rb,Rat Sr Prot)（705-175-147）染色。
注：1. 图1来自：Zatecka E, Bohuslavova R, Valaskova E, et al. The Transgenerational Transmission of the Paternal Type 2 Diabetes-Induced Subfertility Phenotype. Front Endocrinol (Lausanne). 2021;12:763863. Published 2021 Nov 5. doi:10.3389/fendo.2021.7638632. 图2来自：Jackson
部分常用荧光二抗：
| 货号 | 产品 | 规格 |
| 更适合常规免疫荧光实验 | ||
| 115-545-003 | Alexa Fluor® 488-conjugated AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L) | 1.5mg |
| 111-545-003 | Alexa Fluor® 488-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) | 1.5mg |
| 115-585-003 | Alexa Fluor® 594-conjugated AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L) | 1.5mg |
| 111-585-003 | Alexa Fluor® 594-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) | 1.5mg |
| 705-605-003 | Alexa Fluor® 647-conjugated AffiniPure Donkey Anti-Goat IgG (H+L) | 1mg |
| 115-605-003 | Alexa Fluor® 647-conjugated AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L) | 1.5mg |
| 111-605-003 | Alexa Fluor® 647-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) | 1.5mg |
| 115-165-003 | Cy3-conjugated AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L) | 2mg |
| 111-165-003 | Cy3-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) | 2mg |
| 115-095-003 | Fluorescein (FITC)-conjugated AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L) | 2mg |
| 111-095-003 | Fluorescein (FITC)-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) | 2mg |
| 更适合多标记免疫荧光实验 | ||
| 711-005-152 | AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L) (min X Bov,Ck,Gt,GP,Sy Hms,Hrs,Hu,Ms,Rat,Shp Sr Prot) | 1mg |
| 109-006-098 | AffiniPure F(ab‘)2 Fragment Goat Anti-Human IgG, Fcγ Fragment Specific (min X Bov,Hrs,Ms Sr Prot) | 1mg |
| 705-035-147 | Peroxidase-conjugated AffiniPure Donkey Anti-Goat IgG (H+L) (min X Ck,GP,Sy Hms,Hrs,Hu,Ms,Rb,Rat Sr Prot) | 0.5mg |
| 711-035-152 | Peroxidase-conjugated AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L) (min X Bov,Ck,Gt,GP,Sy Hms,Hrs,Hu,Ms,Rat,Shp Sr Prot) | 0.5mg |
| 109-035-088 | Peroxidase-conjugated AffiniPure Goat Anti-Human IgG (H+L) (min X Bov,Hrs,Ms Sr Prot) | 1.5ml |
| 115-035-062 | Peroxidase-conjugated AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L) (min X Hu,Bov,Hrs Sr Prot) | 1.5ml |
| 111-035-144 | Peroxidase-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) (min X Hu,Ms,Rat Sr Prot) | 1.5ml |
| 111-545-144 | Alexa Fluor® 488-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) (min X Hu,Ms,Rat Sr Prot) | 1mg |
| 703-545-155 | Alexa Fluor® 488-conjugated AffiniPure Donkey Anti-Chicken IgY (IgG) (H+L) (min X Bov,Gt,GP,Sy Hms,Hrs,Hu,Ms,Rb,Rat,Shp Sr Prot) | 0.5mg |
| 711-545-152 | Alexa Fluor® 488-conjugated AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L) (min X Bov,Ck,Gt,GP,Sy Hms,Hrs,Hu,Ms,Rat,Shp Sr Prot) | 0.5mg |
| 705-545-147 | Alexa Fluor® 488-conjugated AffiniPure Donkey Anti-Goat IgG (H+L) (min X Ck,GP,Sy Hms,Hrs,Hu,Ms,Rb,Rat Sr Prot) | 0.5mg |
| 715-545-150 | Alexa Fluor® 488-conjugated AffiniPure Donkey Anti-Mouse IgG (H+L) (min X Bov,Ck,Gt,GP,Sy Hms,Hrs,Hu,Rb,Shp Sr Prot) | 0.5mg |
| 711-585-152 | Alexa Fluor® 594-conjugated AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L) (min X Bov,Ck,Gt,GP,Sy Hms,Hrs,Hu,Ms,Rat,Shp Sr Prot) | 0.5mg |
| 115-585-062 | Alexa Fluor® 594-conjugated AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L) (min X Hu,Bov,Hrs Sr Prot) | 1mg |
| 705-585-147 | Alexa Fluor® 594-conjugated AffiniPure Donkey Anti-Goat IgG (H+L) (min X Ck,GP,Sy Hms,Hrs,Hu,Ms,Rb,Rat Sr Prot) | 0.5mg |
| 127-585-099 | Alexa Fluor® 594-conjugated AffiniPure Goat Anti-Armenian Hamster IgG (H+L) (min X Bov Sr Prot) | 1mg |
| 611-585-215 | Alexa Fluor® 594-conjugated AffiniPure Alpaca Anti-Rabbit IgG (H+L) (min X Bov,Hu,Ms Sr Prot) | 1mg |
| 711-605-152 | Alexa Fluor® 647-conjugated AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L) (min X Bov,Ck,Gt,GP,Sy Hms,Hrs,Hu,Ms,Rat,Shp Sr Prot) | 0.5mg |
| 111-605-144 | Alexa Fluor® 647-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) (min X Hu,Ms,Rat Sr Prot) | 0.5mg |
| 715-605-150 | Alexa Fluor® 647-conjugated AffiniPure Donkey Anti-Mouse IgG (H+L) (min X Bov,Ck,Gt,GP,Sy Hms,Hrs,Hu,Rb,Shp Sr Prot) | 0.5mg |
| 703-605-155 | Alexa Fluor® 647-conjugated AffiniPure Donkey Anti-Chicken IgY (IgG) (H+L) (min X Bov,Gt,GP,Sy Hms,Hrs,Hu,Ms,Rb,Rat,Shp Sr Prot) | 0.5mg |
| 611-605-215 | Alexa Fluor® 647-conjugated AffiniPure Alpaca Anti-Rabbit IgG (H+L) (min X Bov,Hu,Ms Sr Prot) | 0.75mg |
| 711-095-152 | Fluorescein (FITC)-conjugated AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L) (min X Bov,Ck,Gt,GP,Sy Hms,Hrs,Hu,Ms,Rat,Shp Sr Prot) | 0.5mg |
| 711-225-152 | Cy2-conjugated AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L) (min X Bov,Ck,Gt,GP,Sy Hms,Hrs,Hu,Ms,Rat,Shp Sr Prot) | 0.5mg |
| 715-225-150 | Cy2-conjugated AffiniPure Donkey Anti-Mouse IgG (H+L) (min X Bov,Ck,Gt,GP,Sy Hms,Hrs,Hu,Rb,Shp Sr Prot) | 0.5mg |
| 711-165-152 | Cy3-conjugated AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L) (min X Bov,Ck,Gt,GP,Sy Hms,Hrs,Hu,Ms,Rat,Shp Sr Prot) | 1.5mg |
| 715-165-150 | Cy3-conjugated AffiniPure Donkey Anti-Mouse IgG (H+L) (min X Bov,Ck,Gt,GP,Sy Hms,Hrs,Hu,Rb,Shp Sr Prot) | 1.5mg |
| 712-175-153 | Cy5-conjugated AffiniPure Donkey Anti-Rat IgG (H+L) (min X Bov,Ck,Gt,GP,Sy Hms,Hrs,Hu,Ms,Rb,Shp Sr Prot) | 0.5mg |
| 713-175-147 | Cy5-conjugated AffiniPure Donkey Anti-Sheep IgG (H+L) (min X Ck,GP,Sy Hms,Hrs,Hu,Ms,Rb,Rat Sr Prot) | 0.5mg |
| 705-675-147 | Brilliant Violet™ 421-conjugated AffiniPure Donkey Anti-Goat IgG (H+L) (min X Ck,GP,Sy Hms,Hrs,Hu,Ms,Rb,Rat Sr Prot) | 0.25ml |
| 111-675-144 | Brilliant Violet™ 421-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) (min X Hu,Ms,Rat Sr Prot) | 0.25ml |
| 115-685-166 | Brilliant Violet™ 480-conjugated AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L) (min X Hu,Bov,Hrs,Rb,Rat Sr Prot) | 0.25ml |
| 713-685-147 | Brilliant Violet™ 480-conjugated AffiniPure Donkey Anti-Sheep IgG (H+L) (min X Ck,GP,Sy Hms,Hrs,Hu,Ms,Rb,Rat Sr Prot) | 0.25ml |
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