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HaCaT细胞培养攻略

更新时间:2023-11-09

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HaCaT细胞是人类永生化表皮细胞,由角质形成细胞培育而来的,保留了角质形成细胞分化能力,是非肿瘤来源的人正常皮肤永生化角质形成细胞株,与正常人角质形成细胞分化特性相似,可以繁殖150代以上,但不是肿瘤细胞,不具有肿瘤特性。

 

细胞名称HaCaT(人永生化角质形成细胞)
细胞来源一位 62 岁患有黑色素瘤男性的病灶外围正常皮肤
形态上皮细胞样
生长特性贴壁生长
营养体系89%MEM(abs9503)+10%胎牛血清优级(abs972)+ 1%双抗(abs9244)+0.2%牛脑垂体提取物(abs9119)
传代1:3—1:5,传代周期2-3天
冻存无血清细胞冻存液plus(abs9478)/ 90%完quan培养液+10%DMSO
应用皮肤生物学和分化研究

 

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该细胞较难消化,胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) ,含酚红(abs47014938)消化5min作用,有时可能高达10min,主要由于细胞不同分化程度和融合度而异。注意消化前一定要用PBS清洗细胞2-3次,铺板时一定要均匀,因为HaCat成片生长,铺板不匀会存在局部生长过密难以消化,生长稀疏部分容易消化过度的情况。

图a低Ca2+条件下HaCat细胞基础状态和图b高Ca2+条件下HaCat细胞分化状态

 

10%FBS培养体系中的 Ca2+足以诱导该细胞分化,也就是说,正常培养体系下,该细胞会逐渐分化,分化前细胞近纺锤形,排列较松散,分化后细胞向立方体发展,排列紧密,呈片状生长。

低钙离子条件下,HaCat增殖更快,K14的表达仅限于表皮基底层,而K10和总合蛋白的存在表明表型分化程度更高。通过免疫荧光实验证实了HaCat细胞分化表型的获得,与第6天相比,分化标记K10在HaCaT细胞中的表达在第14天显著增加,几乎100%的细胞是阳性的,这可能和细胞密度有关。

牛脑垂体物常用作无血清细胞培养的生长补充剂,可促进上皮细胞、内皮细胞和黑色素细胞增殖,广泛用作各种上皮细胞和黑色素细胞培养中的补充剂。此外,其具有抗氧化能力,可对抗过氧化氢诱导的细胞坏死,蛋白质氧化,膜破碎和DNA损伤。

 

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货号品名规格
abs9119牛脑垂体提取物20mg/20mg*5
abs972胎牛血清(优级)500mL
abs9503MEM培养基(含NEAA,含L-谷氨酰胺,不含丙酮酸钠,含HEPES)500mL
abs9244青霉素-链霉素溶液(100×双抗)100mL
abs9478无血清细胞冻存液plus100mL

 

参考文献

1.Wilson VG. Growth and differentiation of HaCaT keratinocytes. Methods Mol Biol. 2014;1195:33-41. doi: 10.1007/7651_2013_42. PMID: 24155234.

2.Colombo I, Sangiovanni E, Maggio R, et al. HaCaT Cells as a Reliable In Vitro Differentiation Model to Dissect the Inflammatory/Repair Response of Human Keratinocytes. Mediators Inflamm. 2017;2017:7435621. doi:10.1155/2017/7435621



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